结核分枝杆菌Ag85A在毕赤酵母中的表达、纯化及酶联免疫斑点试验研究

作者：冯丽萍; 张平静; 汪成富; 孙晓璐; 樊小英; 李忠明

来源：苏州大学学报(医学版), 2012, (02): 220-223+262.

• 毕赤酵母
• 抗原Ag85A
• 酶联免疫斑点实验
• 细胞免疫 Pichia pastoris
• Ag85A
• Elispot
• cellular immunity

目的利用毕赤酵母表达和纯化结核分枝杆菌Ag85A蛋白,以期得到高效刺激T淋巴记忆细胞产生γ-干扰素的特异性抗原。方法用PCR扩增得到Ag85a基因,构建出重组质粒pPic9k-85a,通过电转化进入毕赤酵母,经遗传霉素G418抗性筛选、硫酸铵沉淀浓缩及离子交换层析纯化得到目的蛋白。最后以大肠杆菌和毕赤酵母表达的Ag85A分别为抗原刺激物进行酶联免疫斑点(Elispot)试验,分析其刺激BCG免疫小鼠T淋巴细胞产生γ-干扰素(IFN-γ)的能力。结果在毕赤酵母中成功克隆并稳定表达了Ag85A蛋白,Elispot检测结果表明,毕赤酵母比大肠杆菌产生的Ag85A蛋白,对小鼠T淋巴细胞的刺激效果更加明...

• 单位
  海规生物科技(上海)有限公司; 苏州大学