猫须草总黄酮对人肾透明细胞癌786-O细胞凋亡的影响及转录组学分析

作者：廖宏亮; 郭云涛; 唐帅男; 陈双剑; 朱云; 赵德志; 姜昕; 马端^*

来源：上海中医药大学学报, 2023, 37(03): 48-56.

DOI：10.16306/j.1008-861x.2023.03.009

• 肾茶
• 猫须草总黄酮
• 肾透明细胞癌
• 细胞凋亡
• 转录组测序
• 信号通路

目的：探讨猫须草总黄酮对人肾透明细胞癌786-O细胞凋亡的影响及其机制。方法：用不同浓度（0、25、50、100、200、400μg/mL）的猫须草总黄酮干预人肾透明细胞癌786-O细胞，采用CCK-8法检测细胞活力，采用膜联蛋白V/碘化丙啶（Annexin V/PI）染色检测细胞凋亡。786-O细胞分别用0、139.9μg/mL猫须草总黄酮干预后，采用二代高通量测序平台（Illumina Novaseq 6000）对细胞进行RNA-seq建库测序分析，获得通路相关基因，并采用RT-qPCR和Western blot进行验证。结果：(1)CCK-8检测结果表明，猫须草总黄酮处理人肾透明细胞癌786-O细胞后，细胞活力呈时间及浓度依赖性降低；猫须草总黄酮呈浓度依赖性地促进786-O细胞凋亡。(2)通过转录组测序共鉴定出2 047个差异基因，其中有773个上调，1 274个下调。基因本体论（GO）富集分析显示，差异基因主要涉及细胞应激反应、凋亡信号通路调控、外源性凋亡信号通路等过程；京都基因和基因组百科全书（KEGG）富集分析显示，差异基因主要涉及细胞凋亡、代谢等。(3)通过RT-qPCR和Western blot验证几个相关基因的mRNA和蛋白表达水平，与转录组测序的趋势一致（P<0.01）。结论：通过RNA-seq测序数据分析，发现猫须草总黄酮可能通过肿瘤抑制蛋白p53(p53)、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、核因子-κB(NF-κB)等信号通路诱导人肾透明细胞癌786-O细胞凋亡。

• 单位
  高等研究院; 江西中医药大学