乳痈方对人乳腺上皮细胞炎症模型的体外抗炎作用及其药效物质含量测定研究

作者：陈海锦; 丁美红; 史冬玲; 李玮; 何冰倩^*

来源：浙江中医药大学学报, 2023, 47(07): 712-721.

DOI：10.16466/j.issn1005-5509.2023.07.002

• 乳痈方
• HBL-100
• LPS
• 抗炎作用
• LC-MS/MS
• 含量测定
• 方法学
• 细胞样品

[目的]以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激人乳腺上皮细胞HBL-100建立炎症模型，研究乳痈方的抗炎作用并测定其中的药效成分含量。[方法]以LPS刺激HBL-100细胞，通过检测一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度、白介素-6(interleukin-6,IL-6)水平、细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)细胞活力、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)mRNA的表达，确认炎症模型的建立及抗炎活性。以HBL-100细胞为研究对象，采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用法(ultra performance liquid chromatography tandem-mass spectrometry,UPLC-MS/MS)建立同时测定毛蕊异黄酮等7个成分含量的方法，并对方法的线性、基质效应、回收率、准确度、精密度和稳定性等进行研究。[结果]成功建立HBL-100细胞炎症模型。研究发现，高剂量(1.0 mg·mL-1)乳痈方水提物对HBL-100细胞具有一定杀伤作用，中、低剂量(0.5、0.25 mg·mL-1)乳痈方水提物能够有效降低NO及IL-6水平，对HBL-100细胞炎症模型的抗炎作用显著。高剂量组中能够检测到阿魏酸、柴胡皂苷a、刺芒柄花素、甘草苷、黄芪甲苷、槲皮素及毛蕊异黄酮7个药效成分，而中、低剂量组可检测到除槲皮素及黄芪甲苷以外的5个药效成分。[结论]建立了LPS诱导的HBL-100细胞炎症模型，并初步验证了乳痈方的抗炎活性，建立了测定HBL-100细胞中乳痈方中7个成分含量的LC-MS/MS分析方法，为后续乳痈方提取物的细胞药代动力学、乳痈方中主要抗炎成分及乳腺炎的相关细胞信号通路研究奠定了基础。

• 单位
  浙江中医药大学