1人TLR4胞外区基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

作者：刘静; 李强; 孙守勋; 李玲; 柴若楠; 蒲晓允

来源：免疫学杂志, 2009, (04): 457-460.

• TLR4基因
• 腺病毒载体
• 胞外区 TLR4
• adenovirus vector
• extracellular domain

目的构建并鉴定人TLR4胞外区基因重组腺病毒载体。方法以pUCm-TLR4质粒为模板,运用PCR技术扩增TLR4胞外区目的基因片段,片段回收后经酶切连接穿梭质粒pAdTrack-CMV上,获得重组腺病毒质粒pAdTrack-CMV-TLR4.通过KpnⅠ和HindⅢ双酶切,测序鉴定后,将鉴定正确的质粒经PmeI酶切线性化后,转化到含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态细菌BJ5183中,进行同源重组,卡那抗性筛选阳性克隆,提取质粒,用脂质体介导转染293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR技术,Western blot等方法鉴定重组腺病毒,并进行病毒滴度测定。结果人TLR4...

• 单位
  中国人民解放军陆军总医院; 新桥医院