人凝血因子IX基因在小鼠脂肪干细胞中的稳定表达

作者：李杰; 谢燕燕; 王馨; 王霖虹; 和红霞; 孙庆云; 晏亚辉; 闫振宇

来源：中国实验动物学报, 2020, 28(04): 532-538.

• 目的基因
• 重组腺病毒
• 脂肪间充质干细胞

目的将携带人凝血因子IX(h FIX)基因(F9)的重组腺病毒转染C57BL/6小鼠脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cell,ADSC),经过传代培养后,观察F9是否在ADSC中稳定表达,探索ADSC是否可作为血友病基因治疗的载体细胞。方法取C57BL/6小鼠腹股沟区脂肪,依据组织块悬浮法分离培养小鼠ADSC并进行传代培养,应用携带h FIX基因并含GFP荧光标记的重组腺病毒转染第3代ADSC,转染后再次进行传代培养至第4、5代细胞。荧光显微镜下观察细胞携带荧光数量,RT-PCR检测F9基因表达,ELISA法检测细胞上清液及Western Blot检测细胞内携带目的基因表达蛋白情况。结果 (1)重组腺病毒转染后荧光显微镜下可见荧光表达,细胞传代后仍具有荧光。(2) RT-PCR结果显示:四组ADSC均可表达内参GAPDH基因片段,A、B、C组可检测到目的基因F9的表达,D组未检测到F9的表达。(3) ELISA法检测凝血因子IX抗原(h FIX:Ag)结果显示:A组(81.62±8.82) ng/m L、B组(52.50±3.25) ng/m L、C组(47.41±4.00) ng/m L明显高于D组检测值(0.76±0.44) ng/m L,差异具有显著性(P<0.05)。(4) Western Blot法检测四组细胞内h FIX蛋白表达情况,结果显示A组蛋白表达灰度值(0.68±0.10)、B组(0.49±0.15)、C组(0.18±0.05)明显高于D组蛋白表达灰度值(0.02±0.01),差异具有显著性(P <0.05)。结论重组腺病毒转染ADSC后,经过传代后培养,仍可表达较高的h FIX活性,可以作为血友病基因治疗的载体细胞。

• 单位
  华北理工大学