稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2细胞株的建立及其对p65核转位影响的研究

作者：温贵兰^*; 张升波; 李昌红; 徐丽

来源：中国预防兽医学报, 2018, 40(09): 851-867.

• 猪繁殖与呼吸综合征病毒
• 非结构蛋白NSP2
• 稳定表达

为建立一株稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白2(NSP2)的细胞株,本研究通过脂质体2000介导的方法将携带有PRRSV NSP2基因序列的真核表达载体(pcDNA3.1-5’Flag-Nsp2)瞬时转染于HEK293细胞,应用G418筛选、间接免疫荧光(IFA)与western blot方法进行鉴定,获得了1株稳定表达NSP2的阳性细胞株,命名为NSP2-11C1-HEK293;将TNF-α作用于该细胞株,采用IFA分析稳转细胞内NSP2对p65入核的影响。IFA结果显示NSP2主要在细胞浆中围绕细胞核表达,在细胞中的表达率达95%以上;western blot结果显示出现120 ku的蛋白条带,与预期相符。结果表明本研究获得了一株稳定表达NSP2的阳性细胞株,在该稳转细胞内NSP2对p65的入核并没有影响,这为进一步研究揭示PRRSV的致病机理奠定基础。

• 单位
  动物科学学院; 贵州大学