RNA干扰下调Slug表达对肺癌细胞A549的细胞周期、增殖和侵袭的影响

作者：何巍; 李玉霞; 刘佳; 李巍

来源：中国肿瘤生物治疗杂志, 2013, 20(06): 685-689.

• RNA干扰
• Slug基因
• 肺癌
• A549细胞
• 增殖
• 细胞周期
• 侵袭

目的:应用RNA干扰技术下调肺癌A549细胞中Slug基因的表达,探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和细胞侵袭能力的影响。方法:构建靶向Slug基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP-Neo-Slug,与阴性对照质粒pNeg-shRNA分别用脂质体法转染A549细胞。Real-time PCR和Western blotting验证转染后Slug mRNA和蛋白的表达。CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验分别检测下调Slug表达对A549细胞增殖、细胞周期和侵袭能力的影响。结果:成功构建pGPU6-GFP-NeoSlug载体并转染A549细胞,转染率达90%。与pNeg-shRNA组和空白对照组相比,pSlug-shRNA组A549细胞中Slug mRNA[(0.23±0.01)vs(0.97±0.08)、(1.0±0.09),P<0.05]和蛋白[(0.20±0.09)vs(1.0±0.32)、(1.13±0.26),P<0.05]表达量显著降低;细胞增殖抑制率明显上升[(35.3±5.4)%vs(1.5±0.2)%、(3.3±0.7)%,均P<0.01];细胞增殖指数显著降低[(32.92±0.69)%vs(48.19±0.71)%、(42.88±0.75)%,均P<0.05],并且处于G1期细胞数明显增多[(67.08±0.92)%vs(52.81±0.78)%、(56.12±0.73)%,均P<0.05];细胞侵袭能力显著降低[穿透基底膜细胞数:(55±9)vs(169±12)、(173±15),均P<0.01]。结论:pGPU6-GFP-Neo-Slug转染肺癌A549细胞能有效下调Slug基因的表达,从而抑制A549的增殖侵袭能力、阻滞细胞周期于G1期。

• 单位
  中国医科大学附属第一医院; 沈阳医学院附属中心医院; 中国医科大学