circRNA0128846靶向miR-1183介导人非小细胞肺癌细胞放射抵抗的研究

作者：陆滢; 邓鑫州; 宋仕茂; 骆志国^*

来源：国际放射医学核医学杂志, 2022, 46(01): 16-26.

• 癌, 非小细胞肺
• RNA, 环状
• circRNA0128846
• miR-1183
• 放射抵抗

目的探讨环状RNA(circRNA)0128846对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞放射抵抗的影响及机制。方法应用GEO数据库筛选、采用荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测在人NSCLC细胞A549及其放射抵抗细胞(A549R)中差异表达最显著的circRNA作为目标circRNA, qRT-PCR检测其在人支气管上皮细胞Beas-2B及人NSCLC细胞A549、H460、H1299、H1975中的表达水平。在A549细胞中转染目标circRNA过表达载体, 在A549R细胞中转染目标circRNA沉默载体, 并检测以上细胞经8 Gy X射线照射后的克隆形成能力。应用人类环状RNA数据库和circinteractome数据库预测目标circRNA下游的miRNA, qRT-PCR检测A549R细胞中目标circRNA沉默后表达水平上升最显著的miRNA作为目标miRNA。qRT-PCR检测A549细胞中过表达目标circRNA后目标miRNA的表达情况;通过双荧光素酶报告基因分析人胚肾细胞293T中过表达目标miRNA后目标circRNA的表达情况;qRT-PCR检测目标miRNA在A549、A549R细胞中的表达水平。在A549细胞中转染目标miRNA抑制剂以沉默目标miRNA, 在A549R细胞中转染目标miRNA模拟物以过表达目标miRNA, 并检测以上细胞经8 Gy X射线照射后的克隆形成能力;将过表达目标circRNA的A549细胞进行8 Gy X射线照射并在该细胞中过表达目标miRNA, 检测细胞的克隆形成能力。组间数据的比较采用独立样本t检验。结果 qRT-PCR检测结果显示, circRNA0128846为目标circRNA, 且其在人NSCLC细胞A549、H460、H1299、H1975中的相对表达水平均高于人支气管上皮细胞Beas-2B(t=6.200、7.903、6.010、6.132, 均P<0.01)。过表达circRNA0128846的A549细胞经照射后的克隆形成能力增强(0.22%对0.45%, t=4.427, P<0.05);沉默circRNA0128846后A549R细胞经照射后的克隆形成能力降低(0.23%对0.10%, t=3.780, P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示, miR-1183为目标miRNA, 在A549细胞中过表达circRNA0128846显著下调miR-1183的表达(t=6.002, P<0.01);双荧光素酶报告基因分析证实过表达miR-1183可显著下调circRNA0128846的表达(t=4.562, P<0.05);miR-1183在A549R细胞中的相对表达水平显著低于亲本A549细胞(t=6.025, P<0.01)。过表达miR-1183显著降低A549R细胞经照射后的克隆形成能力, 沉默miR-1183显著增强A549细胞经照射后的克隆形成能力(0.26%对0.15%、0.21%对0.31%, t=3.671、3.293, 均P<0.05), 且过表达miR-1183显著降低了过表达circRNA0128846对A549细胞克隆形成能力的促进作用(1.90%对1.20%, t=6.325, P<0.01)。结论 circRNA0128846作为miR-1183的吸附海绵, 可抑制miR-1183的表达进而抑制其放疗增敏作用, 从而促进人NSCLC细胞的放射抵抗。

• 单位
  湖北医药学院附属太和医院