逆转录病毒载体介导shRNA对人胚胎肾细胞中p53基因的沉默作用

作者：刘扬; 马淑梅; 刘晓冬; 金顺子; 徐瑞明; 武宁; 赵银龙; 龚守良; 刘树铮

来源：吉林大学学报(医学版), 2006, 32(2): 228-231.

DOI：10.3969/j.issn.1671-587X.2006.02.015

• RNA干扰
• 基因
• p53
• 逆转录病毒载体
• shRNA

目的:检测逆转录病毒载体介导的小发夹环RNA(small hairpin RNA,shRNA)对人胚胎肾细胞(HEK293)中p53基因的干扰作用.方法:将人H1启动子由XholⅠ和EcoRⅠ酶切位点插入CMV启动子上游,人CD4基因替代匀霉素抗性基因,作为检测标志.针对人野生型p53基因设计的shRNA被连接在H1启动子的下游,构建含有shRNA的逆转录病毒载体LTRH1-p53,即RNAi表达载体;利用流式细胞术检测逆转录病毒感染HEK293细胞72 h后细胞内P53蛋白水平的变化.结果:成功构建LTRH1-p53载体,该载体感染HEK293细胞后72 h,与感染空病毒载体LTRH1组相比,P53蛋白表达降至空病毒载体LTRH1组的69%(P＜0.01).结论:LTRH1-p53表达载体成功使p53基因沉默,shRNA表达载体的使用为基因功能研究提供有力工具.

• 单位
  吉林大学; 公共卫生学院