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摘要
目的探索基于常规PCR和定量PCR结合的方法对DNA完整性的评估。方法对来自于同一个人不同处理提取到完整性不同的DNA,使用看家基因短扩增片段的荧光定量PCR结果分析不同样本的相对含量,用来对初始模板DNA进行相对定量和校正。对初始浓度为1 ng/μL的DNA进行梯度稀释,最高稀释64倍。对梯度稀释后的DNA模板进行长片段的扩增,目标片段为约1.8 kb、3.1 kb和3.5 kb,使用琼脂糖电泳检验扩增条带的大小和亮度。结果短片段定量PCR分析结果表明相同初始模板量不同完整性样本之间CT值无显著性差异。长片段PCR的结果显示,约1.8 kb条带扩增效果与DNA完整性之间无明显关联,但3.1 kb和3.5 kb左右的条带的扩增受基因组DNA完整性影响,等量起始模板的完整性越好,扩增的条带亮度越高。结论通过荧光定量PCR校正初始模板量以后,可以通过长片段产物的扩增效果反映DNA模板的完整性。
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