miR-193a-3p/E2F6调控细胞焦亡在鼻咽癌中的机制研究

作者：刘丹; 万浪; 岑瑞祥^*; 徐芬; 喻辉

来源：中国耳鼻咽喉头颈外科, 2023, 30(11): 686-692.

DOI：10.16066/j.1672-7002.2023.11.002

• 鼻咽肿瘤
• 细胞增殖
• 细胞焦亡
• 分子机制

目的 探讨miR-193a-3p/E2F6在鼻咽癌（NPC）中对细胞焦亡的调控作用及其潜在的分子机制。方法 双荧光素酶基因报告实验评估了miR-193a-3p对E2F6的靶向调控作用。HNE-2细胞分为不同处理组：对照组、空白质粒组、沉默E2F6质粒组、空白质粒（miRNA）组、过表达miR-193a-3p组、过表达miRNA+空白（E2F6）质粒组以及过表达miRNA+过表达（E2F6）质粒组。通过qPCR检测miR-193a-3p的表达水平，Western blot检测E2F6蛋白的表达以及NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N信号通路的激活情况。同时，使用扫描电子显微镜（scanning electron microscope,SEM）观察细胞形态，CCK-8法评估细胞增殖情况，进行集落形成实验和Transwell实验来检测细胞集落形成数量和迁移数量。结果 与对照组（0.90±0.02）和空白质粒组（0.88±0.02）相比，沉默E2F6质粒组中E2F6蛋白（0.26±0.02）的表达水平显著降低，NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N信号通路明显被激活，SEM显示细胞发生肿胀。CCK-8实验、集落形成实验和Transwell实验显示细胞活力、集落形成数量和迁移数量均下降（P均<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实E2F6是miR-193a-3p的靶基因。同对照组（1.01±0.03,1.02±0.02）和空白质粒（miRNA）组（1.02±0.04,0.21±0.03）相比，过表达miR-193a-3p组（2.02±0.32,0.23±0.02）中的miR-193a-3p的表达水平升高，E2F6的表达水平显著降低。而NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N信号通路明显被激活，SEM显示细胞发生肿胀。CCK-8实验、集落形成实验和Transwell实验显示细胞活力、集落形成数量和迁移数量均下降（P均<0.05）。同过表达miR-193a-3p组和过表达miRNA+空白（E2F6）质粒组相比，发现过表达miR-193a-3p结合过表达E2F6组中E2F6蛋白的含量上升，NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N蛋白的含量下降，SEM显示细胞肿胀减轻，CCK-8实验、集落形成实验和Transwell实验显示细胞活力、集落形成数量和迁移数量均上升（P均<0.05）。结论 miR-193a-3p通过靶向抑制E2F6激活NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N通路，诱导NPC细胞发生细胞焦亡，并抑制其增殖、克隆和侵袭。

• 单位
  黄石市中心医院; 湖北理工学院