结核分枝杆菌38kD蛋白真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的分泌性表达

作者：白娜; 毛莹莹; 颜仁和; 林明; 陈兴露; 李青青; 陈惠莹; 刘军; 李红卫

来源：生物技术通讯, 2017, 28(04): 451-533.

DOI：10.3969/j.issn.1009-0002.2017.04.009

• 结核分枝杆菌38kD蛋白
• 真核表达载体
• 分泌表达
• HEK293T细胞

目的:构建含结核分枝杆菌38kD蛋白基因的真核表达载体并转染HEK293T细胞,高效表达分泌性38kD蛋白。方法:设计合成的结核分枝杆菌38kD基因被克隆到T载体,然后亚克隆到真核表达载体pcDNA3.0,经酶切鉴定正确后,PEI转染法导入293T细胞,换不含血清的DMEM培养基培养3 d后收集细胞及上清,采用Western印迹检测38kD蛋白的表达。结果:酶切结果显示,获得正确的含38kD基因的重组表达载体;Western印迹结果显示表达载体导入293T细胞中后能在细胞及上清中检测到38kD蛋白表达。结论:构建了含重组结核分枝杆菌38kD蛋白基因的真核表达载体pcDNA3.0-38kD,该载体可在哺乳动物细胞HEK293T中高效分泌性表达38kD蛋白,为结核病诊断试剂盒研发奠定了基础。

• 单位
  玉溪市人民医院; 南方医科大学; 广州伯尼兹生物科技有限公司