微小RNA-130b-3p通过抑制ERBB2IP和PPARγ表达促进肾小管上皮细胞转分化

作者：王万鹏; 王玲; 车霞静; 牟姗; 张敏芳; 邵兴华; 方炜; 王琴; 戚超君; 沈剑萧; 李舒; 井冉; 倪兆慧

来源：中华肾脏病杂志, 2015, 31(12): 932-939.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-7097.2015.12.009

• 狼疮肾炎
• 微RNAs
• 上皮细胞-间充质细胞转分化
• 衔接蛋白质类,信号转导
• PPARγ

目的探讨高表达的微小RNA-130b-3p(MiR-130b-3p)参与肾脏损害的可能机制。方法肾小管上皮细胞(HK-2)分别转染MiR-130b-3p模拟物(mimic)、对照mimic(NC mimic),并给予10μg/LTGF-β1刺激。实时定量PCR和Western印迹分别检测转染72 h后细胞Ⅳ型胶原蛋白(CollegenⅣ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollegenⅠ)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白表达水平;生物信息学预测MiR-130b-3p潜在靶基因,Western印迹检测潜在靶基因ERBB2IP和PPA脚蛋白表达水平;分别构建含ERBB2IP 3′端非编码区(3′-UTR)和PPARγ3′-UTR的双荧光素酶报告基因载体,采用双荧光素酶报告基因方法检测靶基因荧光活性。结果无刺激转染HK-2细胞后MiR-130b-3p mimic组与NC mimic组比较CollegenⅣ、α-SMA、CollegenⅠ、E-cadherin mRNA和蛋白表达差异均没有统计学意义(均P>0.05)。但在TGF-β1刺激后,与NC mimic组比较,MiR-130b-3p mimic组CollegenⅣ、α-SMA、CollegenⅠmRNA和蛋白表达水平均显著上调,E-cadherin的表达降低(均P<0.05)。与NC mimic组比较,MiR-130b-3p mimic组潜在靶基因ERBB2IP和PPARγmRNA和蛋白表达水平均下调(均P<0.05);双荧光素酶报告基因结果显示,与NC mimic组比较,MiR-130b-3p mimic组ERBB2IP荧光素酶活性降低(P<0.01),而突变(mut)-MiR-130b-3p mimic组无明显变化(P>0.05);与NC mimic+mut-PPAR/-3′UTR共转染组比较,MiR-130b-3p+mut-PPARγ-3′UTR组PPARγ荧光素酶活性降低,而PPAR/-3′UTR共转染MiR-130b-3p组PPARγ荧光素酶活性比mut-PPARγ-3′UTR共转染MiR-130b-3p组进一步降低,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 MiR-130b-3p通过直接抑制ERBB2IP和PPARγ的表达而促进肾小管上皮细胞上皮细胞-间充质细胞转分化作用,从而参与狼疮肾炎早期肾脏损害。

• 单位
  上海交通大学医学院附属仁济医院