Caspase抑制剂对体外氧糖剥夺损伤大鼠海马神经元的保护作用

作者：姜骏; 蒋龙元; 符岳; 毛小英; 罗银秋; 谭健韶; 颜梅

来源：中华神经医学杂志, 2014, 13(05): 467-471.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2014.05.009

• Caspase抑制剂
• 海马神经元
• 氧糖剥夺损伤

目的探讨Caspase抑制剂对体外氧糖剥夺损伤大鼠海马神经元的保护作用及机制。方法新生SD乳鼠海马神经元经体外原代培养7 d后分为对照组、氧糖剥夺/复氧组、Caspase抑制剂苄氧羰基-缬氨酰-丙氨酰-门冬氨酰氟甲基酮(Z-VAD-FMK)组和二甲基亚砜(DMSO)组,其中氧糖剥夺/复氧组氧糖剥夺6h后复糖复氧,Z-VAD-FMK组在氧糖剥夺复氧过程中加入20μmol/L Z-VAD-FMK,DMSO组在氧糖剥夺复氧过程中加入1‰药物溶媒DMSO。复氧复糖24 h后光镜及电镜下观察各组海马神经元的形态学变化,MTT比色法测定细胞存活率和培养液中乳酸脱氢酶(L=DH)含量,Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪检测神经元凋亡率,比色法测定神经元Caspase-3活性,Western blotting法分析Caspase-3活性蛋白表达。结果氧糖剥夺/复氧组细胞胞体肿胀,部分胞膜破裂,细胞完整性破坏,细胞核水肿,线粒体肿胀,嵴排列混乱;Z-VAD-FMK组细胞损伤较氧糖剥夺/复氧组减轻,大多数神经元形态完整,细胞内颗粒增多,细胞器肿胀减轻,线粒体嵴结构存在,分布较规则。与氧糖剥夺/复氧组比较,Z-VAD-FMK组海马神经元吸光度值(0.204±0.019 vs 0.303±0.018)及细胞存活率(0.481%±0.045%vs 0.704%±0.040%)明显增高,LDH含量[(406.500±21.286)U/L vs(326.000±20.278)U/L]明显降低,细胞凋亡率(49.700%±3.100%vs 29.820%±2.839%)明显降低,反应Caspase-3活性片段的吸光度值明显降低,Caspase-3活性蛋白表达(1.070±0.077 vs 0.785±0.058)明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Caspase抑制剂可通过抑制Caspase-3蛋白活性,减轻海马神经元的体外氧糖剥夺损伤。

• 单位
  中山大学; 中山大学孙逸仙纪念医院