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摘要
目的 获得纯度较高和有酶活性的新型冠状(新冠)病毒(SARS-CoV-2)非结构蛋白14(Nsp14)。方法 根据大肠埃希氏菌(E.coli)的密码子偏好性，分析新冠病毒原始株基因nsp14的稀有密码子，并对其进行优化。将nsp14克隆至4个不同的表达载体并进行表达；通过对表达量和可溶性的比较分析，选择一个表达效果最好的重组表达质粒并优化表达条件；目的蛋白经谷胱甘肽亲和柱纯化后，用半胱氨酸家族蛋白酶(3C)切除融合标签，再分别利用谷胱甘肽亲和柱和分子筛柱纯化蛋白质。最后通过尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳对其活性进行鉴定。结果 Nsp14的基因在大肠杆菌中表达存在较多的稀有密码子，其中部分稀有密码子呈现近距离分布和串联分布。pGEX6P1-GST-OPTI-Nsp14重组质粒在大肠杆菌中表达的可溶性效果最好，其最佳表达温度为30℃。经纯化后获得了较纯的不含标签的Nsp14,该蛋白具有核酸酶活性。结论 本研究成功地表达和纯化出具有核酸酶活性的新冠病毒Nsp14,为进一步推进对新冠病毒Nsp14的结构和功能研究奠定了基础，为筛选靶向Nsp14的抗病毒治疗药物提供了有利的条件。
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