结核分支杆菌14KDa蛋白的基因克隆、表达、纯化及其抗原性的研究

作者：周丽蓉; 徐敬华; 罗永艾; 王国治

来源：中国现代医学杂志, 2008, (05): 535-538.

• 分枝杆菌
• 结核
• 14KDa蛋白
• 基因表达
• 抗原性
• 酶联免疫吸附测定 mycobacterium tuberculosis
• 14 KDa protein
• gene expression
• antigenicity
• enzyme linked immunosorbent assay

目的基因克隆、表达、纯化结核分枝杆菌14KDa蛋白,研究其抗原性,评价其在血清学诊断中的价值。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增14KDa蛋白基因片断,将其插入到高效表达载体PET-22b(+)上,构建重组质粒PET-22b(+)/14KDa,重组质粒在大肠杆菌中由IPTG诱导表达,表达产物经金属离子鳌合亲和层析方法纯化,免疫印迹和酶联免疫吸附(ELISA)试验分析重组蛋白的抗原性。结果构建了具有正确基因序列的14KDa蛋白重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中以可溶性蛋白形式表达,重组蛋白的表达量占菌体蛋白的40.8%,经过一步金属离子鳌合亲和层析后得到纯度...

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院; 中国食品药品检定研究院