人穿孔素在sf9昆虫细胞中的表达和纯化

作者：陈风晔; 刘孟雨; 周雅博; 梁晓雨; 黄波; 解静^*

来源：基础医学与临床, 2020, 40(01): 54-59.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2020.01.011

• 蛋白纯化
• 人穿孔素
• 蛋白活性
• 打孔

目的建立重组人穿孔素的表达和快速纯化方法。方法在sf9昆虫细胞内表达带His标签人穿孔素。使用人工制作简易的镍(Ni)柱装置进行蛋白质亲和层析。采用考马斯亮蓝染色、银染法及流式细胞计量术纯化的蛋白分析其理化性质;用人乳腺癌细胞MCF-7的PI染色法鉴定其生物学活性。结果纯化出的穿孔素具有在细胞膜打孔的生物学活性。与常规蛋白纯化方法如离子交换色谱、分子筛和疏水作用层析等方法相比,该方法操作简便、成本低,为人穿孔素接下来的研究以及其他蛋白质的纯化提供一定参考。结论以一种简单的方法在sf9昆虫细胞内表达并纯化出了有活性的人穿孔素。

• 单位
  北京协和医学院; 医学分子生物学国家重点实验室; 中国医学科学院基础医学研究所