梅毒螺旋体Hsp10蛋白的原核表达与纯化

作者：伍仙; 何树光; 吴翔; 唐玲丽

来源：中国病原生物学杂志, 2016, 11(12): 1057-1061.

DOI：10.13350/j.cjpb.161201

• 梅毒螺旋体
• 热休克蛋白10
• 基因克隆
• 蛋白纯化

目的原核表达及纯化梅毒螺旋体(Treponema palludim,Tp)热休克蛋白10(Heat shock protein 10,Hsp10)。方法利用Clustal Omega软件对Tp与其他物种的Hsp10蛋白进行多序列比对并运用生物信息学方法分析Hsp10蛋白亲水性和结构。设计特异性引物,以Tp基因组为模板,PCR扩增Hsp10基因。回收PCR产物并用EcoRI和HindIII双酶切,酶切片段与同样酶切的质粒pET28a相连,构建表达重组质粒pET28a-Hsp10,转化大肠埃希菌BL21(DE3),采用IPTG诱导重组Hsp10蛋白表达,用镍离子柱纯化目的蛋白。结果 Tp Hsp10基因编码蛋白是一个亲水性蛋白,α-螺旋、无规卷曲和β片层分别占5.7%、47.7%和45.4%,三级结构与结核分枝杆菌Hsp10(PDB:1p3h.1.C)类似,可由7个Hsp10组成一个圆形结构。PCR扩增获得的Hsp10基因全长为267bp,连接到表达载体pET28a得到重组质粒pET28a-Hsp10,编码含His标签的重组Hsp10蛋白。重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达分子质量单位为13.7ku的重组Tp Hsp10蛋白,与理论值相符。重组蛋白经镍离子柱层析纯化,获得单一条带的Hsp10。结论成功构建重组质粒pET28a-Hsp10并表达和纯化获得Hsp10蛋白,为研究其功能奠定了基础。

• 单位
  中南大学; 湖南中医药高等专科学校附属第一医院; 基础医学院; 中南大学湘雅二医院