巢式逆转录聚合酶链反应在轮状病毒型别鉴定中的适用性

作者：王革; 胡广宏; 王云瑾; 马超^*

来源：微生物学免疫学进展, 2020, 48(02): 28-32.

DOI：10.13309/j.cnki.pmi.2020.02.005

• 巢式逆转录聚合酶链反应
• 轮状病毒
• 型别鉴定
• 验证

目的以巢式逆转录聚合酶链反应(nested reverse transcription PCR, Nested-RT-PCR)鉴定轮状病毒型别,并对其适用性进行验证。方法提取轮状病毒基因组RNA,以逆转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR, RT-PCR)扩增轮状病毒VP7基因序列,再以Nested-RT-PCR扩增各型别轮状病毒特异性目的基因片段,将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测其基因片段的大小,并与Genbank报道的相应基因序列片段预计大小进行对比,以确定各毒株的型别。分析该方法的特异性、灵敏度及准确性,对Nested-RT-PCR鉴定轮状病毒型别的适用性进行验证。结果 Nested-RT-PCR法可特异性扩增各型别轮状病毒特异性目的基因片段,所检测的轮状病毒型别特异性目的基因片段与Genbank报道的相应基因序列片段大小相符,可用于轮状病毒型别鉴定。适用性验证结果显示,此方法所用引物特异性好,能特异性扩增相应型别的轮状病毒目的基因片段;具有较高的灵敏度,可检出RNA质量浓度为0.5 ng/μL的样本,其检测灵敏度高于PrimeScriptTM One Step RT-PCR试剂盒检测灵敏度;准确性检测结果与PrimeScriptTM One Step RT-PCR试剂盒检测结果一致,且同型别轮状病毒检测重复试验结果一致。结论该方法特异、灵敏、准确,可有效判断轮状病毒毒株型别,避免了PrimeScriptTM One Step RT-PCR试剂盒检测由于样本含量低而造成的检测结果的假阴性,适用于轮状病毒毒株的检测和多价轮状病毒疫苗的质量控制。

• 单位
  兰州生物制品研究所有限责任公司