山羊关节炎脑炎病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立及应用

作者：汪伟; 杜倩; 韩知晓; 辛佳亮; 闫修魁; 梁莹莹; 朱远致; 曹亮; 孙文超^*; 胡传活^*; 郑敏^*

来源：中国兽医科学, 2020, 50(03): 294-299.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0043

• 山羊关节炎脑炎病毒
• SYBR GreenⅠ
• 荧光定量PCR
• Gag基因

为建立检测山羊关节炎脑炎病毒(caprine arthritis-encephalitis virus,CAEV)的快速诊断方法,本研究根据CAEV甘肃株Gag基因设计1对引物,并以含有CAEV甘肃株全基因组序列的质粒pUC57-CAEV为模板,建立CAEV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并验证其特异性、灵敏性和重复性。结果显示,本研究所建立的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的Ct值与标准品模板在1.19×109～1.19×101copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.997,斜率为-3.74,检测下限为1.19×101copies/μL,且对痘苗病毒、山羊痘病毒均无扩增。重复性试验结果显示,批间与批内变异系数均小于1%,重复性好。本研究首次建立了CAEV Gag基因的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法,为CAEV的快速检测和病毒感染预防提供了技术手段。

• 单位
  温州大学; 广西壮族自治区动物疫病预防控制中心; 广西大学