摘要

为了研究自噬相关基因ATG10(Autophagy related gene 10)在鱼类免疫应答中的功能,研究克隆了大黄鱼(Larimichthys crocea)ATG10基因(LcATG10)的cDNA序列,其开放阅读框全长747个核苷酸,编码248个氨基酸的蛋白,包含1个Autophagy_act_C结构域。系统进化分析显示, LcATG10和其他硬骨鱼类ATG10聚成一支,与金头鲷和石斑鱼ATG10亲缘关系最近。LcATG10在所检测的正常大黄鱼各组织中都有表达。在病毒类似物poly (I:C)刺激后,大黄鱼脾脏和头肾组织中LcATG10的表达水平显著上调,分别在12h和6h达到峰值(9.4和5.9倍)。LcATG10在大黄鱼头肾细胞系(LYCK)、原代巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞中也均有表达,在原代粒细胞中的表达量相对较高;在poly (I:C)刺激后,大黄鱼原代头肾粒细胞和LYCK细胞中LcATG10的表达水平显著上调。过表达Lc ATG10的鲤上皮瘤(Epithelioma papulosum cyprinid, EPC)细胞受鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus, SVCV)感染48h后,细胞病变效应(Cytopathic effects, CPEs)明显低于对照组;细胞培养上清中SVCV病毒滴度为103.55 TCID50/mL,显著少于对照组; SVCV标志基因SVCV-G、SVCV-M和SVCV-P的表达水平也显著低于对照组,分别是对照组的0.022、0.015和0.022倍。这些研究结果表明LcATG10在大黄鱼抗病毒免疫应答中发挥作用,为深入研究自噬在大黄鱼抗病毒免疫中的分子机制奠定了基础。