微小RNA-375调控自噬抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖和转移

作者：王星星; 宋虎; 杜晨阳; 王振; 张建军^*; 沈中阳

来源：天津医药, 2018, 46(12): 1267-1377.

DOI：10.11958/20181137

• 癌,肝细胞
• 自噬
• 微RNAs
• 细胞增殖
• 肿瘤转移

目的探讨微小RNA-375(miR-375)通过调控自噬相关蛋白(Atg)14介导的自噬对肝癌细胞(SMMC-7721)增殖和转移能力的影响。方法将SMMC-7721细胞分别用miR-375模拟物、抑制物以及Atg14的干扰RNA处理,并建立缺氧1 h复氧6 h的模型,分为miR-375 NC组、miR-375 mimics组、miR-375 inhibitor组以及siRNA NC组、Atg14 siRNA组、miR-375+Atg14 siRNA组。TargetScan预测miR-375与Atg14基因相关性。荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-375 NC组、miR-375 mimics组、miR-375 inhibitor组miR-375、Atg14 m RNA相对表达量。免疫细胞化学染色检测3组细胞内N-钙黏素(N-Cadherin)和β-连环蛋白(β-catenin)表达分布情况。绿色荧光蛋白-红色荧光蛋白-轻链(mGFP-RFP-LC3)自噬双标腺病毒转染3组细胞,荧光显微镜下观察自噬体形成情况。平板克隆检测肝癌细胞增殖情况。Western blot检测Atg14、泛素结合蛋白(P62)、轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、酵母Atg6同源物(Beclin1)、N-Cadherin、β-catenin和波形蛋白(Vimentin)表达情况。结果 miR-375与Atg14基因相关性较高,qRT-PCR显示过表达miR-375能抑制Atg14 mRNA表达;反之能促进Atg14 mRNA表达。过表达miR-375能抑制肝癌细胞内N-Cadherin表达、提高β-catenin表达水平,抑制肝癌细胞增殖能力(P<0.01);而抑制miR-375表达能促进N-Cadherin表达、降低β-catenin表达水平,提高肝癌细胞增殖能力(P<0.01)。过表达miR-375能抑制Atg14、LC3Ⅱ、Beclin1表达,促进P62表达(P<0.01);反之能促进Atg14、LC3Ⅱ、Beclin1表达,抑制P62表达(P<0.01)。荧光显微镜下观察到过表达miR-375可抑制自噬体形成,而抑制miR-375表达能促进自噬体形成(P<0.01)。干扰Atg14表达后可增强miR-375对肝癌细胞增殖、转移能力的抑制作用(P<0.01)。结论激活miR-375能抑制肝癌细胞增殖和转移,而抑制miR-375能促进肝癌细胞增殖和转移,其机制可能与miR-375通过靶向调控Atg14抑制自噬,从而抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖和转移有关。

• 单位
  天津市第一中心医院; 天津医科大学