基于钙激活氯离子通道检测胞质内第二信使Ca2+

作者：肖云萍; 解宇浩; 张嘉琪; 郭佳琦; 丁旭; 郝峰^*; 王国庆

来源：解剖学报, 2021, 52(02): 311-316.

DOI：10.16098/j.issn.0529-1356.2021.02.024

• 钙激活氯离子通道
• 细胞模型
• 第二信使
• 2+浓度" name="keyword">Ca2+浓度
• 流式细胞术

目的建立一种基于钙激活氯离子通道(CaCC)可敏感检测胞质内第二信使Ca2+的细胞模型。方法构建氯离子通道蛋白1(ANO1)和YFP-H148Q/I152 L真核表达载体,应用脂质体转染法构建共表达ANO1和YFPH148Q/I152 L的FRT细胞,倒置荧光显微镜观察其表达情况,流式细胞仪检测细胞纯度;应用膜片钳技术研究CaCC生理特性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型的有效性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型可筛选CaCC调节剂;荧光探针法检测加入CaCC激活剂后胞质内的Ca2+浓度。结果倒置荧光显微镜下观察到ANO1表达在细胞膜上,YFP-H148Q/I152 L表达于胞质中;该模型具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性;成功构建共表达ANO1和YFP-H148Q/I152 L的FRT细胞模型;该模型可筛选CaCC调节剂,荧光变化斜率值与CaCC调节剂浓度成剂量依赖关系;荧光变化斜率值可反映胞质内Ca2+浓度,该模型可敏感检测胞质内Ca2+浓度。结论此细胞模型可以高效敏感检测胞质内第二信使Ca2+浓度,为Ca2+信号相关靶点的研究提供了一种简便快捷的方法。

• 单位
  北华大学; 吉林医药学院