一种新的B链C端去四肽胰岛素的研制方法

作者：王一成; 石嘉豪; 张元兴; 费俭

来源：细胞生物学杂志, 2007, (05): 771-776.

• 单体胰岛素前体
• B链C端去四肽胰岛素
• 胰蛋白酶
• 羧肽酶B monomeric insulin precursor
• monomeric destetrapeptide human insulin
• trypsin
• carboxypeptidase B

报道了将单体胰岛素前体(MIP)经胰蛋白酶和羧肽酶B两步连续酶切获得B链C端去四肽胰岛素(DTI)的方法。MIP由甲醇酵母表达,最高发酵表达量达到150mg/L。发酵液中MIP通过疏水层析,分子筛初步纯化后直接进行酶切,在胰蛋白酶酶切3h后加入抑制剂paminobenzamidine处理15min,然后直接加入羧肽酶B酶切6h,再通过反相柱纯化即可得到纯品DTI,从分子筛到最后DTI,总纯化得率达到77%。按中国药典小白鼠惊厥法测定得DTI的生物活力为22IU/mg,是胰岛素的80%,在Superdex G-75分子筛上测定DTI的解离聚合曲线,证明其是单体。

• 单位
  华东理工大学; 生物反应器工程国家重点实验室; 同济大学