基于Cre-LoxP系统的高尔基体蛋白73胰腺特异性敲除小鼠模型建立与鉴定

作者：李靖飞; 张小鹃; 徐艺心; 张艳红; 万禄明; 魏从文; 王炜; 钟辉^*

来源：军事医学, 2023, 47(07): 487-492.

• 高尔基体蛋白73
• Cre-LoxP系统
• 胰十二脂肠同源异型盒1
• 胰腺
• 小鼠模型

目的 建立并鉴定高尔基体蛋白73(GP73)胰腺特异性敲除小鼠模型，为后续探究胰腺GP73的生理及病理功能提供基础。方法 采用受精卵同源重组的方式，将两个LoxP位点分别插入GP73基因4号外显子两端，建立GP73flox/+小鼠。将GP73flox/+小鼠与Pdx1Cre+小鼠杂交获得GP73flox/+Pdx1Cre+小鼠，经GP73flox/+小鼠与GP73flox/+Pdx1Cre+小鼠杂交获得的GP73flox/floxPdx1Cre+小鼠，即为所需模型小鼠。通过PCR鉴定flox及Cre基因型；采用实时荧光定量PCR(qPCR)及Western印迹分别从mRNA水平和蛋白水平鉴定胰腺GP73敲除效果及组织特异性；通过小鼠杂交后代的基因型统计分析，判断出生情况是否符合孟德尔遗传定律；通过计算小鼠各组织重量与体重的比例分析小鼠的生长发育情况。结果 通过小鼠杂交和PCR鉴定，成功获得GP73flox/floxPdx1Cre+小鼠。与对照小鼠相比，模型小鼠胰腺GP73的mRNA水平和蛋白水平显著降低，而其他组织无明显差异，表明模型小鼠建立成功。此外GP73flox/floxPdx1Cre+小鼠能正常出生，无胚胎致死现象，各组织的生长发育与对照小鼠无显著差异，可用于后续研究。结论 成功建立GP73胰腺特异性敲除小鼠模型，为胰腺GP73功能研究提供了重要实验材料。

• 单位
  安徽大学; 株洲市中心医院