亲和柱色谱原位酶切法纯化重金属镉结合的金属硫蛋白-3

作者：郑伟娟; 杨锋; 吴芳; 陆纯; 华子春

来源：色谱, 2006, 24(03): 279-283.

DOI：10.3321/j.issn:1000-8713.2006.03.016

• 亲和柱色谱
• 人金属硫蛋白-3
• 融合表达
• Factor Xa原位酶切
• 纯化 affinity column chromatography
• human metallothionein-3(hMT-3)
• fusion(expression)
• Factor Xa digestion on column
• purification

按照人金属硫蛋白-3(hMT-3)的基因序列,选用大肠杆菌偏爱的密码子合成了全长hMT-3基因,并将其插入大肠杆菌融合表达质粒pALEX的多克隆位点中,在谷胱甘肽-硫-转移酶(G ST)下游与G ST融合表达。通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)LysS中表达了与重金属离子镉结合的融合蛋白G ST-C d2+-hMT-3。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SD S-PAGE)分析表明融合蛋白主要在超声上清液中。分别通过“先纯化、后酶切”和“亲和柱色谱原位酶切”两种方法纯化了C d2+-hMT-3,比较了两种方法的纯化效率和得率,表明原位酶切法...

• 单位
  南京大学; 医药生物技术国家重点实验室