负载Wharton’s Jelly源间充质干细胞来源外泌体的水凝胶可促进小鼠创面修复

作者：徐崔博诚; 徐正保; 余承洋; 蒋祖福^*

来源：浙江大学学报(医学版), 2023, 52(06): 766-776.

• 创面修复
• 间充质干细胞
• 外泌体
• 海藻酸盐水凝胶
• 巨噬细胞
• 小鼠

目的:探究负载Wharton’s Jelly衍生的间充质干细胞（WJMSC）来源的外泌体（WEX）的水凝胶对创面修复的作用。方法:从WJMSC中提取WEX，通过透射电子显微镜和纳米粒度分析仪分析WEX的形态和大小，通过蛋白质印迹法检测外泌体表面标志物（CD9、CD81和Calnexin）鉴定WEX。通过结合WEX与海藻酸钠水凝胶来制备WEX水凝胶，扫描电子显微镜观察WEX水凝胶的形态，流式细胞仪检测WEX水凝胶的流变行为，BCA法评估WEX水凝胶的体外释药性能。海藻酸纳水凝胶、WEX和WEX水凝胶作用巨噬细胞系RAW264.7后，流式细胞术检测CD86和CD206的表达。建立小鼠全层皮肤创伤模型，将小鼠随机分为空白对照组、WEX对照组和WEX水凝胶组，按照分组分别将磷酸盐缓冲液、WEX和WEX水凝胶覆盖到创面。造模第3天，取小鼠皮肤组织，采用平板计数法评价WEX水凝胶的抗菌功效。造模后第15天处死小鼠，计算残余创面百分比，苏木精-伊红染色及Masson染色后观察皮肤创面组织学变化，免疫组织化学法检测皮肤创面组织中CD86、CD206、CD31和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果:成功从WJMSC中提取出WEX。制备的WEX水凝胶呈现规整的三维网络结构，具有良好的流变学和药物控释性能。WEX水凝胶可以促进体外RAW264.7细胞从M1表型极化为M2表型。空白对照组、WEX对照组和WEX水凝胶组残余创面百分比分别为（27.5±3.4）%、（15.3±1.2）%和（7.6±1.1）%,WEX水凝胶明显增强WEX对小鼠皮肤创面的修复作用（P<0.05），且抗菌性能优于WEX(P<0.05)。WEX水凝胶组的真皮厚度、新生毛囊数和胶原蛋白沉积率均明显高于其余两组（均P<0.05）。WEX水凝胶可抑制皮肤创面组织中CD86的阳性表达，并促进CD206、CD31和VEGF的阳性表达（均P<0.05）。结论:WEX水凝胶能够通过调节巨噬细胞极化明显促进小鼠皮肤创面修复。

• 单位
  台州学院