对虾急性肝胰腺坏死病病原菌RAA检测方法的建立

作者：陈平亚; 吴山楠^*; 何翠华; 张亮亮; 吴少荣; 王绥家; 吴毓浪

来源：中国动物检疫, 2022, 39(09): 128-133.

DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2022.09.023

• 急性肝胰腺坏死病
• 对虾
• pirB基因
• 荧光RAA方法

针对对虾急性肝胰腺坏死病（acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND）病原菌检测，建立了一种重组酶介导等温扩增（recombinase acid amplification,RAA）检测方法。根据pVA1质粒保守序列设计特异性探针和引物，分别以不同稀释浓度梯度的含pirB靶序列的重组质粒pMD18-T-pirB为模板进行荧光RAA法检测，评价其灵敏度；对溶藻弧菌、河流弧菌、创伤弧菌等病原菌进行荧光RAA法检测，评价其特异性；取8.2×103 copies/μL浓度的pMD18-T-pirB重组质粒进行荧光RAA试验，评价其重复性；对人工感染样品用RAA方法进行应用试验，以水产行业标准（SC/T 7233—2020）推荐的荧光探针PCR法作为平行对照。结果显示：该方法可对pirB靶序列基因片段进行有效扩增，最低检出限为8.2×101 copies/μL，与其他病原菌无交叉反应，重复试验变异系数为0.41%，与荧光探针PCR方法符合率为100%。结果表明，该方法特异性强、灵敏度高、重复性好、操作步骤简单，可用于对虾样品的AHPND现场检测。本研究为AHPND快速检测提供了技术支撑。

• 单位
  海口海关技术中心