摘要
目的观察Regucalcin(RGN)在草酸钙结石大鼠肾脏和肾小管上皮细胞中的表达特点,探讨其在草酸钙结石形成过程中的作用及机制。方法采用1%乙二醇+1%氯化铵自由饮用的传统方法构建大鼠肾草酸钙结石模型,通过偏光显微镜观察大鼠肾组织的晶体,并使用Western blot、实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)、免疫组织化学(IHC)法检测RGN在草酸钙结石模型大鼠中的表达变化。使用不同浓度的一水草酸钙晶体(COM)刺激大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,通过Western blot和FQ-PCR方法检测RGN的表达。结果偏光显微镜观察显示:造模组全部大鼠肾组织切片肾小管内均有草酸钙晶体沉积,而对照组大鼠肾脏未发现晶体。Western blot法检测大鼠肾皮质RGN的表达发现,造模组大鼠肾组织RGN表达明显低于正常对照组,其mRNA的相对表达量为6%(t=21.459,P=0.000);IHC法也同样显示造模组大鼠肾皮质RGN的表达降低,而且以晶体黏附处的肾小管上皮细胞降低尤为明显。使用COM处理大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E后,检测RGN的表达发现,在不同浓度(0、25、50、100μg/cm2)COM晶体处理后,RGN的表达均明显降低。COM 100μg/cm2组mRNA的相对表达量为47.4%(t=4.285,P=0.013)。结论 RGN有可能参与了大鼠肾草酸钙结石的形成和进展的调控。
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单位汉川市人民医院; 广州医科大学附属第一医院