烟曲霉抗原Asp f16 HLA-A~* 0201限制性的CD8~+ CTL抗原表位生物信息学预测与实验室鉴定

作者：赵作涛; 孙铮; 万喆; 朱平; 李若瑜

来源：中国真菌学杂志, 2011, 6(02): 87-92.

• 烟曲霉
• Asp f16
• 抗原表位
• 树突状细胞
• 细胞毒性T细胞

目的预测与鉴定烟曲霉抗原Asp f16的HLA-A*0201限制性CD8+细胞毒性T细胞(CTL)抗原表位。方法以国人常见的HLA-A*0201位点为靶点,依据生物信息学软件扫描烟曲霉特异性抗原Asp f16的全部427个氨基酸序列。使用HLA-A*0201转基因小鼠制备骨髓来源的树突状细胞(DC)和CTL。流式细胞仪技术检测DC表面MHC II类抗原,CD80,CD86和CD11c的表达来验证其是否成熟。ELISPOT试验检测烟曲霉抗原多肽特异性CTL产生的细胞因子IFN-γ。四聚体(Tetramer)试验证实烟曲霉特异性CTL与抗原肽,HLA-A*0201分子复合体的亲和性。结果根据与MHC I类分子结合的半衰期评分,选择了3个HLA-A*0201限制性抗原表位。流式细胞仪分析示成熟DC高表达HLA II类抗原,CD80,CD86和CD11c。Tetramer试验证实烟曲霉特异性T细胞受体与抗原肽,HLA-A*0201分子复合体的高亲和性。ELISPOT实验结果表明烟曲霉抗原肽体外可以活化CD8+CTL,被负载了抗原肽的DC刺激活化后可以产生IFN-γ。结论本研究成功鉴定烟曲霉抗原Asp f16的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位,可作为疫苗设计的候选表位,为进一步研发新型抗烟曲霉疫苗提供参考。

• 单位
  北京大学第一医院; 北京大学