寡核苷酸微阵列技术用于检测幽门螺杆菌克拉霉素耐药相关23S rRNA基因多态性

作者：陈韶华; 厉有名; 王群燕; 虞朝辉; 徐磊

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2006, (11): 1053-1056.

DOI：10.3760/j:issn:0254-5101.2006.11.022

• 幽门螺杆菌
• 耐药
• 基因多态性

目的幽门螺杆菌(Hp)克拉霉素耐药与23S rRNA基因A2142G、A2143G和C2182T点突变相关。本研究旨在探索建立一种快速、简便的检测方法,获取Hp克拉霉素耐药相关23S rRNA基因多态性的流行病学资料,为临床合理用药提供依据。方法收集胃黏膜标本,用于病理检查、提取DNA。根据核苷酸位点设计相应探针,探针3′端以氨基修饰,氨基与探针序列之间以间隔臂相连,将探针用芯片点样仪点至玻片上。下游引物5′末端用cy3荧光标记,进行不对称PCR扩增。其产物与芯片杂交,杂交后洗涤、扫描芯片,观察信号强度。非荧光标记引物扩增PCR产物克隆至T载体,测序验证芯片结果。结果(1)寡核苷酸微阵列技术与测序检测Hp 23S rRNA基因多态性结果完全一致。(2)经病理和PCR证实为Hp阳性的54例标本,杂交结果显示A2142位点均为野生型(54/54)；A2143G突变率为11．11％(6/54),尚未发现A2143C和A2143T的突变；C2182T突变率为12．96％(7/ 54),尚未发现C2182A和C2182G的突变,其余均为野生型。结论(1)利用寡核苷酸微阵列技术检测Hp克拉霉素耐药的23S rRNA基因多态性,快速、简便而准确,可以高通量并直接检测胃黏膜而不需进行细菌培养,为根除Hp选择用药提供科学依据,推动个体化治疗方案的实施。(2)本研究没有发现Hp 23S rRNA基因2142点突变,A2143G和C2182T突变率分别为11．11％和12．96％。

• 单位
  浙江大学医学院附属第一医院