HNP-3相互作用蛋白的酵母双杂交筛选

作者：张伟义; 邓璐霞; 黄宁; 朱涛

来源：重庆医学, 2011, 40(33): 3335-3339+3433.

DOI：10.3969/j.issn.1671-8348.2011.33.003

• α防御素
• 双杂交系统技术
• 受体
• 促肾上腺皮质激素
• 人α防御素3
• 胎肾上腺cDNA文库 alpha-defensins
• two-hybrid system techniques
• receptors
• corticotropin
• human neutrophil peptide 3
• fetal adrenal cDNA library

目的筛选胎肾上腺cDNA文库中与人中性粒细胞多肽(HNP-3)成熟肽具有相互作用的蛋白分子。方法通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)成功获得HNP-3成熟肽基因,并将其插入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转染酵母细胞AH109,而后经缺陷性培养基上培养并观察pGBKT7-HNP-3在AH109中的表达情况,检测诱饵载体有无毒性作用和自激活功能。同时收集胎肾上腺,提取RNA,通过自我检测、分析、报告技术(SMART技术)制备人胎肾上腺cDNA文库。并采用Match-maker LexA酵母双杂交系统从胎肾上腺cDNA文库中筛选与HNP-3成熟肽相互作用的蛋白。最后通过PCR筛选获得阳...

• 单位
  四川大学; 华西医学中心; 四川大学华西医院