稳定表达CD19-FLUC-GFP的CT26细胞系的构建及鉴定

作者：郭雨洁; 段海潇; 程奕宁; 杨斌丰; 胡翰; 刘滨磊; 汪洋^*

来源：生物工程学报, 2023, 1-17.

DOI：10.13345/j.cjb.230468

• CD19
• 萤火虫荧光素酶
• CT26细胞
• 嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)
• 慢病毒

实体瘤缺乏明确嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell， CAR-T)治疗靶点。因此，通过慢病毒将已经明确的靶点分子CD19带入实体瘤细胞系，研究CD19 CAR-T细胞对其的杀伤，能够为CAR-T细胞针对实体瘤的治疗提供潜在的支撑。本研究利用三质粒慢病毒系统构建了稳定表达CD19，萤火虫荧光素酶(firefly luciferase， FLUC)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein， GFP)的结肠癌CT26细胞系CT26-CD19-FLUC-GFP。该细胞系与CT26细胞系的生长活性一致。通过流式细胞术检测不同代次CT26-CD19-FLUC-GFP细胞，证实了CT26-CD19-FLUC-GFP细胞连续传代至第5代、10代、22代后CD19及GFP的稳定表达。进一步证实，连续传代至第22代的CT26-CD19-FLUC-GFP细胞中的CD19 mRNA及FLUC表达水平显著高于对照组CT26细胞。与T细胞相比，CD19 CAR-T细胞能够显著杀伤CT26-CD19-FLUC-GFP细胞及MC38-CD19细胞。CT26-CD19-FLUC-GFP细胞腹腔植入小鼠体内一周后，通过活体成像仪可以检测到腹腔区域的FLUC表达。上述结果表明，成功构建了稳定表达CD19-FLUC-GFP的CT26细胞系，且该细胞系能够被CD19 CAR-T细胞特异性杀伤。

• 单位
  武汉滨会生物科技股份有限公司; 湖北工业大学