口蹄疫病毒Asia1/JS/China/2005株基因组全长感染性克隆的构建

作者：李平花; 白兴文; 卢曾军; 孙普; 郭建宏; 曹伟军; 刘湘涛; 殷宏; 刘在新

来源：畜牧兽医学报, 2009, (05): 706-711.

• 口蹄疫病毒
• Asia1/JS/China/2005株
• 全长cDNA
• 转录物RNA
• 病毒拯救 foot-and-mouth disease virus
• Asia1/JS/China/2005 strain
• full-length cDNA
• transcript RNA
• virus rescues

利用长距离RT-PCR技术扩增病毒基因组3′端覆盖口蹄疫病毒Asia1/JS/China/2005株近全长的3个片段(共约7.5 kb),并利用单一酶切位点将其分别克隆到pBluescriptSK+载体上。利用融合PCR扩增到基因组5′端含有15个C碱基的基因片段(约700 bp),并将其连接至pGEM-T载体。最后将这4个片段的阳性克隆装配至剔除T7启动子的低拷贝载体pcDNA3.1/Zeo(+)中构建该病毒株的全长cDNA克隆。以构建的FMDV Asia1/JS/China/2005株全长cDNA为模板,使用T7RNA聚合酶在体外转录得到病毒RNA,通过脂质体将其导入BHK细胞获得拯救病毒...

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 农业部; 甘肃农业大学