猪圆环病毒Ⅱ型体外诱导3D4/2细胞炎症模型的建立

作者：赵怡; 张文; 陈家骥; 宋漫玲; 陈奇; 谢小东; 胡庭俊^*

来源：中国畜牧兽医, 2022, 49(12): 4920-4927.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.12.039

• 猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)
• 炎性因子
• 3D4/2细胞

【目的】通过对猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)体外感染3D4/2细胞浓度、时间与细胞炎症水平进行探讨，建立PCV2体外感染3D4/2细胞炎症反应模型，以期为后期药物调控PCV2诱发3D4/2细胞炎症反应的研究奠定基础。【方法】将3D4/2细胞分为对照组及100、10-1、10-2和10-3 PCV2感染组，每组3个重复。对照组用DMEM培养，各PCV2感染组用不同稀释倍数PCV2液培养，2 h后均更换为含5%胎牛血清(FBS)的DMEM维持液进行培养，培养4、8、12和24 h后分别收集细胞及细胞上清液。采用Griess法检测一氧化氮(NO)水平，DCFH-DA荧光探针法检测活性氧(ROS)水平，酶标法检测还原型谷胱甘肽(GSH)水平，分光光度法检测黄嘌呤氧化酶(XOD)和髓过氧化物酶(MPO)活性，ELISA法测定白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10、γ干扰素(IFN-γ)、IL-8、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)以及环氧合酶1(COX-1)和COX-2的分泌水平。【结果】100至10-3 PCV2作用4、8、12和24 h均能够成功感染3D4/2细胞。与对照组相比，100 PCV2在感染3D4/2细胞4、8、12、24 h后ROS水平均极显著升高(P<0.01),10-1至10-3 PCV2感染3D4/2细胞8、12、24 h后ROS水平显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01);100至10-3 PCV2感染3D4/2细胞8、12、24 h后，细胞内NO浓度及MPO活性显著提高(P<0.05),细胞上清液中的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10、IFN-γ、IL-8和MCP-1水平及COX-1活性均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),其中100 PCV2感染3D4/2细胞后，各炎症因子水平上升最显著，且随着时间的延长，NO浓度逐渐升高，XOD活性逐渐降低。【结论】PCV2可诱导3D4/2细胞炎症反应，且100 PCV2体外感染3D4/2细胞4～12 h是建立炎症模型的最佳条件。

• 单位
  广西大学