刚地弓形虫GJS株微线体蛋白3基因真核表达质粒的构建及在BHK-21细胞中的表达

作者：张燕丽; 曹丽艳; 芦赟; 苟惠天; 王艳华; 付宝权; 李文卉; 张德林

来源：中国兽医科学, 2009, (02): 125-129.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2009.02.005

• 刚地弓形虫
• 微线体蛋白3
• 基因克隆
• 真核表达 Toxoplasma gondii
• microneme protein 3
• gene cloning
• eukaryotic expression

采用PCR技术从刚地弓形虫GJS株基因组DNA中扩增微线体蛋白3(MIC3)基因,并克隆到pMD18-T载体,经PCR、酶切及测序鉴定后,阳性重组质粒酶切并亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)后进行PCR、酶切及测序鉴定。将重组质粒转染BHK-21细胞。间接免疫荧光染色证明,质粒DNA成功转染到细胞中并得以表达。Western-blot分析证实,细胞裂解液及上清样品中有1条约39.2 ku的条带,可被山羊抗刚地弓形虫超免疫血清所识别,大小与预测值相符。表明,真核表达质粒pcDNA3-MIC3中的MIC3基因在BHK-21细胞中获得表达且表达产物具有抗原性。

• 单位
  甘肃农业大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室