塞内卡病毒A SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

作者：王晨; 罗愿; 陈彦希; 周远成^*; 刘骁^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(02): 162-167.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0013

• 塞内卡病毒A
• 荧光定量PCR
• SYBR Green Ⅰ

为深入研究塞内卡病毒A的病原学及流行病学，本研究分离获得了1株塞内卡病毒A的重庆地区毒株并将其命名为SVA-XN2021。针对VP1基因，设计了1对特异性引物，将SVA-XN2021株编码区克隆入载体pcDNA3.1(+)，构建了以重组标准阳性质粒pcDNA3.1(+)-SVA为模板的SVA的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法，并进行了特异性、敏感性和重复性试验。结果显示，本研究建立的荧光定量PCR检测方法的Ct值与标准品模板在1.0×101～1.0×106copies/μL的范围内线性关系良好，相关系数为0.994 8。且用该方法对PEDV、TGEV、PDCoV等猪常见的腹泻病样品检测时无扩增，表明其特异性良好；该方法检测下限可达到1.0×101copies/μL，比常规RT-PCR敏感性高10倍；组内变异系数介于0.1%～0.29%之间，组间变异系数介于0.1%～0.81%之间，说明该检测方法重复性较好。上述结果表明，本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法可以作为SVA的重要诊断技术，有利于SVA的防治。

• 单位
  四川省畜牧科学研究院; 西南大学