牛支原体P48蛋白及其片段的表达、纯化及间接ELISA检测方法的建立

作者：马海彬; 刘云霞; 张必凯; 韩继成; 孙文超; 解长占; 靖杰; 肖朋朋; 张萍; 尹逊哲; 鲁会军^*; 金宁一^*

来源：中国兽医学报, 2019, 39(04): 678-694.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.04.13

• 牛支原体
• P48蛋白
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 间接ELISA

为了建立一种快速、特异、敏感的检测牛支原体血清抗体的方法,对牛支原体(M.bovis)P48膜蛋白基因进行密码子优化,并在编码基因两端加入酶切位点。利用生物学软件对P48蛋白进行抗原位点和亲水性分析,选择P48蛋白的主要抗原表位区和亲水性区域以及全基因进行原核表达。采用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定及反应原性分析。结果显示,表达的P48全蛋白、28～185、221～455位氨基酸区域蛋白均能与牛支原体阳性血清发生特异性反应,P48(221～455)效果最好。采用Ni-NTA对目的蛋白进行纯化,并基于纯化的P48(221～455)蛋白建立了一种间接ELISA检测方法。该方法组内及组间变异系数均小于7%,重复性较好。临床样本检测结果表明,建立的检测方法符合率较高。

• 单位
  动物科技学院; 广西大学; 吉林农业大学; 吉林大学; 延边大学; 长春中医药大学