重组蓖麻毒素A链的原核表达和单克隆抗体的制备、鉴定及应用

作者：郭建巍; 王顺涛; 郭黎明; 冯健男; 马骢; 沈倍奋

来源：免疫学杂志, 2007, (04): 424-428.

• 蓖麻毒素
• 蓖麻毒素A链
• 融合蛋白
• 夹心ELISA Ricin
• Ricin toxin A
• Fusion protein
• Sandwich ELISA

目的实现重组蓖麻毒素A链(rRTA)的高效表达,获得rRTA的单克隆抗体,建立基于单抗的蓖麻毒素检测方法。方法用计算机辅助设计的RNA二级结构预测和偏性密码子等手段设计引物;用PCR将rRTA基因克隆至载体pET32a(+);用双酶切和DNA测序技术对构建的载体进行鉴定;IPTG诱导rRTA原核表达载体pET32a(+)/rRA/BL21,用镍离子亲和层析纯化,ELISA及Western blot鉴定rRTA蛋白;rRTA免疫Balb/c小鼠,建立杂交瘤细胞株,获得抗rRTA的单克隆抗体,用Westernblot鉴定。结果构建了rRTA原核表达载体pET32a(+)/rRA/BL21,实现了r...

• 单位
  军事医学科学院基础医学研究所; 中国人民解放军海军总医院