核糖核酸干扰抑制P-糖蛋白在大鼠耐药星形胶质细胞中过度表达

作者：陈蕾; 田林郁; 杨天华; 周东

来源：中华神经科杂志, 2008, 41(10): 699-703.

DOI：10.3321/j.issn:1006-7876.2008.10.013

• 腺病毒科
• RNA
• 小分子干扰
• P糖蛋白
• 星形细胞
• 转染

目的 利用腺病毒载体介导的短发夹RNA(shRNA)抑制大鼠多药耐药基因mdr1b及其编码的P-糖蛋白(Pgp)的表达,探讨其改善癫疴耐药现象的可行性.方法 通过同源重组方法构建腺病毒,表达针对mdr1b的shRNA,感染马桑内酯诱导的耐药星形胶质细胞模型.实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测感染5 d内细胞mdr1b和Pgp的表达,流式细胞术检测罗丹明泵出率.结果 得到6×1010pfu/ml滴度的重组腺病毒,转染星形胶质细胞后,细胞mdr1b和Pgp表达明显被抑制,干扰率达94%(P<0.01).Ads-EGFP-shRNA1-U6感染组细胞罗丹明泵出率15.8%,明显低于对照组(56.2%,F=127.5,P<0.05).结论 成功构建针对大鼠mdr1b的RNAi腺病毒载体,并在体外证实其对大鼠mdr1b表达的高效抑制作用,为进一步探索难治性癫癎的基因治疗奠定基础.

• 单位
  神经内科; 四川大学华西医院