天马颗粒对结肠直癌细胞中FLI-1启动子甲基化影响

作者：王华帅; 武明胜; 李一金; 谢彪; 罗敏; 何永恒^*

来源：湖南中医药大学学报, 2022, 42(12): 2016-2021.

DOI：10.3969/j.issn.1674-070X.2022.12.010

• 天马颗粒
• 结直肠癌
• DNA甲基化
• Friend白血病整合素1转录因子
• 甲基化转移酶

目的 研究天马颗粒对结直肠癌细胞中Friend白血病整合素1转录因子（Friend leukemia integration 1, FLI-1）启动子甲基化的作用机制。方法 以结直肠癌细胞HCT116、HT29、Caco-2为研究对象，每种细胞分为3组：Blank组、NC组、TMKL组。Blank组为空白对照，NC组予以空白血清干预，TMKL组予以天马颗粒血清干预。采用CCK8筛选天马颗粒血清最佳干预浓度，Western blot检测各组细胞中FLI-1蛋白表达，qPCR法检测各组细胞FLI-1 mRNA表达，ELISA法检测DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1, DNMT1)、DNA甲基转移酶3a(DNA methyltransferase 3a, DNMT3a)蛋白表达，甲基化特异性PCR(methylation-Specific PCR, MSP)检测各组细胞中FLI-1启动子甲基化。结果 天马颗粒血清对HCT116、HT29和Caco-2细胞增殖有抑制作用，其中20%的天马颗粒血清浓度抑制效果最佳。在HCT116细胞分组和Caco-2细胞分组中，同Blank组、NC组相比，TMKL组FLI-1蛋白及mRNA表达升高（P<0.05）,Blank组同NC组相比差异无统计学意义（P>0.05）；在HT29细胞分组中，Blank组、NC组和TMKL组FLI-1蛋白及mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。在HCT116、HT29和Caco-2细胞中，同Blank组、NC组相比，TMKL组DNMT1、DNMT3a的表达量下降（P<0.05）,Blank组同NC组相比差异无统计学意义（P>0.05）；在HCT116细胞中，同Blank组、NC相比，TMKL组细胞FLI-1启动子产生了部分去甲基化，甲基化减弱，非甲基化增多，NC组同Blank相比无变化；在HT29细胞中，Blank组、NC组和TMKL组细胞FLI-1启动子无甲基化；在Caco-2细胞中，同Blank组、NC相比，TMKL组细胞FLI-1启动子完全去甲基化，NC组同Blank相比无变化。结论 天马颗粒可能通过抑制DNMT1、DNMT3a蛋白表达，促使结直肠癌细胞中FLI-1启动子去甲基化，进而上调其表达。

• 单位
  湖南省中医药研究院附属医院; 湖南中医药大学; 湖南中医药大学第二附属医院