猪囊尾蚴排泄分泌抗原TPx对仔猪树突状细胞活化的影响

作者：叶井明; 何威; 刘慧媛; 鱼潇; 罗波; 刘美辰; 周必英^*

来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(03): 286-293.

• 猪囊尾蚴
• 排泄分泌抗原
• 硫氧还蛋白过氧化物酶
• 树突状细胞

目的 探讨猪囊尾蚴排泄分泌抗原（ESA）硫氧还蛋白过氧化物酶（TPx）对仔猪树突状细胞（DC）活化的影响。方法 体外诱导培养健康仔猪髓源DC，培养7 d后，加入终浓度为100 ng/ml的脂多糖（LPS）刺激，继续孵育2 d，分别收集培养未成熟DC (imDC)和成熟DC (mDC)，光学显微镜和扫描电镜下观察其培养1～9 d的形态学变化，流式细胞术检测其表面标志物CD1和主要组织相容性复合体Ⅱ（MHC-Ⅱ）的表达情况。另收集培养后7 d的imDC，设阴性对照组、TPx组、排泄分泌抗原（ESA）组、LPS阳性对照组，分别加入RPMI 1640培养基、 TPx (50μg/ml)、 ESA (50μg/ml)、 LPS (100 ng/ml)刺激48 h后，流式细胞术检测DC表面标志物MHC-Ⅱ、CD80、CD86的表达情况；ELISA检测DC细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素6 (IL-6)、 IL-10、 IL-12的分泌水平。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果 光学显微镜下可见，培养第1天，imDC呈卵圆形，形态单一；随着培养时间延长，DC体积逐渐增大，出现伪足和刺突等，并从卵圆形变为不规则状。扫描电镜下可见，与imDC相比，mDC形态不规则，大致呈长梭形，从胞体辐射出众多长短不一的突起，呈树枝状分布，为典型的树突状结构。流式细胞术检测结果显示，imDC中表达CD1、MHC-Ⅱ的DC占比分别为（0.113±0.005）%、（0.430±0.016）%，低于mDC的（21.400±0.327）%、（21.333±0.450）%(t=130.341、 92.906，均P <0.05)。TPx组表达MHC-Ⅱ、 CD80、 CD86的DC占比分别为（15.300±0.245）%、（22.900±0.374）%、（13.033±0.249）%，均低于LPS阳性对照组的（19.000±0.374）%、（31.600±0.082）%、（21.300±0.245）%(t=11.53、 46.32、 43.84，均P <0.05)和ESA组的（18.365±0.618）%、（40.400±0.356）%、（30.300±0.283）%](t=9.55、 93.17、 91.57，均P <0.05); TPx组表达MHC-Ⅱ的DC占比高于阴性对照组的（12.133±0.492）%(t=9.87, P <0.05)。ELISA检测结果显示，培养上清中，TPx组DC分泌IL-6水平为15.682±0.660，低于阴性对照组的21.041±0.901 (t=6.51, P <0.05)；分泌TNF-α、 IL-6、 IL-10和IL-12水平均低于LPS阳性对照组的169.037±7.823、 42.118±1.932、 34.730±1.772、 52.504±2.431 (t=36.79、32.09、 13.09、 35.05，均P <0.05)；分泌IL-12水平低于ESA组的23.854±1.020 (t=6.93, P <0.05)。结论 TPx通过诱导DC表面MHC-Ⅱ高表达、CD80和CD86低表达，以及降低IL-6的分泌水平来介导免疫耐受。

• 单位
  遵义医科大学