陆地棉转录因子GhWRKY91基因的原核表达及鉴定

作者：顾丽姣; 魏恒玲; 喻树迅^*

来源：安徽农业大学学报, 2021, 48(06): 878-882.

DOI：10.13610/j.cnki.1672-352x.20220106.012

• 棉花
• GhWRKY91基因
• SDS-PAGE
• 原核表达
• 表达分析

为了筛选出高表达棉花GhWRKY91可溶性蛋白的原核表达载体。以中棉所10号叶片的cDNA为模板PCR扩增GhWRKY91基因,扩增产物分别构建到4个不同的原核表达载体pET-22b(+)、pET-32a(+)、pMAL-c5x和pGEX-4T-1。将重组载体pET-22b(+)-GhWRKY91、 pET-32a(+)-GhWRKY91、 pMAL-c5x-GhWRKY91和pGEX-4T-1-GhWRKY91转化到大肠杆菌菌株BL21(DE3)或Arctic-Express~(TM)(DE3)RP中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析不同原核表达载体的蛋白表达情况。结果显示,pET-22b(+)-GhWRKY91和pET-32a(+)-GhWRKY91在BL21(DE3)中以及pMAL-c5x-GhWRKY91在Arctic-Express~(TM)(DE3)RP中均未见明显蛋白表达,而pGEX-4T-1-GhWRKY91在Arctic-Express~(TM)(DE3)RP中表达的蛋白基本存在于上清中,可获得可溶性蛋白。因此,将GhWRKY91基因构建到pGEX-4T-1原核表达载体上可成功获得可溶性蛋白。

• 单位
  棉花生物学国家重点实验室; 中国农业科学院棉花研究所; 河北农业大学