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摘要
背景老视是影响中老年视觉质量和生活质量的主要原因之一,主要与晶状体上皮细胞(LECs)随年龄增长而发生的氧化损伤有关。SS31是线粒体靶向的抗氧化剂,研究其对LECs氧化损伤的保护作用对老视的预防和治疗有重要意义。目的探讨SS31对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的人LECs氧化损伤的保护作用。方法用含质量分数10%胎牛血清(FBS)的DMEM低糖培养液对人LECs细胞株HLEB-3进行培养和传代,用200μmol/L t-BHP处理HLEB-3细胞18 h以构建细胞氧化损伤模型。培养的细胞分为空白对照组、t-BHP模型组、10 nmol/L SS31+T-BHP组、100 nmol/L SS31+T-BHP组、1μmol/L SS31+T-BHP组、10μmol/L SS31+T-BHP组和100μmol/L t-BHP组,应用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的存活率,以筛选SS31的最佳药物浓度。再将培养的细胞分为空白对照组、t-BHP模型组和1μmol/L SS31+t-BHP共培养组。采用JC-1染色法并用流式细胞仪检测各组HLEB-3细胞线粒体膜电位的改变,用MitoSOX染色在荧光显微镜下检测各组活细胞线粒体中产生活性氧簇(ROS)的情况。结果 200μmol/L t-BHP加入培养液作用HLEB-3细胞18 h后,与空白对照组的细胞存活率(100±0)%比较,模型组细胞存活率下降至(53.42±2.52)%,不同浓度的SS31组细胞存活率均较模型组明显升高,各组细胞存活率的差异有统计学意义(F=58.349,P<0.01),其中以1μmol/L SS31组细胞存活率最高(82.13±3.15)%,明显高于t-BHP模型组,差异有统计学意义(t=28.710,P<0.05)。各组HLEB-3细胞线粒体膜电位检测结果提示,正常对照组红/绿荧光强度比值为7.07±0.06,t-BHP模型组为4.46±0.14,1μmol/L SS31+t-BHP共培养组为5.76±0.26,3个组间差异有统计学意义(F=172.332,P<0.01),空白对照组和1μmol/L SS31+t-BHP共培养组红/绿荧光强度比值均明显高于t-BHP模型组,差异均有统计学意义(t=2.609、1.303,P<0.001)。荧光显微镜下显示正常对照组HLEB-3线粒体内仅可见微弱的ROS红色荧光,t-BHP模型组细胞线粒体内ROS荧光明显增强,红色荧光染色的细胞明显增多,而1μmol/L SS31+t-BHP共培养组细胞线粒体内ROS荧光明显弱于t-BHP模型组。结论 SS31能有效预防t-BHP诱导的HLEB-3细胞的氧化损伤,可能是治疗老视和其他年龄相关性晶状体疾病一个潜在的靶向治疗手段。
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单位眼科学国家重点实验室; 中山大学中山眼科中心; 河南省眼科研究所
