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摘要
目的探讨长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对人晶状体上皮细胞(LECs)凋亡的影响及其机制。方法收集2018年12月至2019年8月在新乡市第一人民医院行白内障手术的23例年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜组织, 同时收集20例正常供体眼晶状体前囊膜组织。采用实时荧光定量PCR法检测并比较不同人群晶状体前囊膜组织中KCNQ1OT1和miR-199a-5p mRNA表达水平。体外培养人LECs(SRA01/04), 将细胞分为空白对照组、模型对照组、小干扰RNA-阴性对照(siR-NC)组、siR-KCNQ1OT1组、miR-NC组、miR-199a-5p组、siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组和siR-KCNQ1OT1+anti-miR-199a-5p组, 其中空白对照组不做任何处理, 模型对照组采用100 μmol/L过氧化氢(H2O2)培养细胞24 h制作氧化应激损伤模型, 其余各组分别采用相应转染试剂按照脂质体法转染6 h后换用100% μmol/L H2O2处理细胞24 h。采用实时荧光定量PCR法检测各组晶状体前囊膜组织和各组LECs细胞中KCNQ1OT1和miR-199a-5p表达水平;采用MTT法检测各组细胞活力值;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;采用Western blot法检测各组B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)表达水平;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;采用双荧光素酶报告实验检测KCNQ1OT1和miR-199a-5p的关系。结果年龄相关性白内障患者前囊膜内KCNQ1OT1相对表达量为2.41±0.42, 明显高于正常人的0.97±0.19, 差异有统计学意义(t=14.112, P<0.001);miR-199a-5p相对表达量为0.36±0.12, 明显低于正常人的1.04±0.15, 差异有统计学意义(t=16.507, P<0.001)。与空白对照组比较, 模型对照组中KCNQ1OT1和bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量明显增加, miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞活力值、SOD活性值明显降低, 差异均有统计学意义(均P<0.001);与siR-NC组比较, siR-KCNQ1OT1组细胞中KCNQ1OT1和bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量降低, bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值增加, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。与miR-NC组比较, miR-199a-5p组KCNQ1OT1-WT荧光素酶活性显著降低, 差异有统计学意义(t=21.131, P<0.001);与miR-NC组相比, miR-199a-5p组miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值明显升高, bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量显著降低, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。siR-KCNQ1OT1+anti-miR-199a-5p组miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值明显低于siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组, 细胞凋亡率、bax蛋白相对表达量和MDA含量显著高于siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论抑制KCNQ1OT1能够增强人LECs活力, 抑制H2O2诱导的细胞凋亡和氧化应激反应, 其作用机制可能与上调miR-199a-5p有关。
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单位新乡市第一人民医院; 郑州大学第一附属医院
