改良PCR-RFLP法检测MTHFR基因C677T 位点多态性

作者：何震宇; 顾取良; 游娟

来源：广东药学院学报, 2019, 35(05): 669-673.

DOI：10.16809/j.cnki.2096-3653.2019060701

• 5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因
• 单核苷酸多态性
• 基因分型
• 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性

目的建立一种简便、实用、准确的检测5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T位点多态性的方法。方法在分析MTHFR基因C677T多态位点相关序列的基础上,设计1对特异性引物,通过聚合酶链反应扩增1个535 bp的靶片段,该靶片段跨越MTHFR基因C677T多态位点,且在多态位点上游163 bp处含有一个限制性核酸内切酶HinfI识别位点,该识别位点可作为后续HinfI酶切分型的内对照,PCR产物用HinfI快速消化,再用琼脂糖凝胶电泳分离消化产物,得出相应的限制性酶切图谱用于判别基因型。结果可从限制性酶切图谱中明确判断各样品MTHFR基因C677T位点基因型,CC、CT、TT 3种基因型样品的分型结果与基因测序完全吻合。采用本法检测了100例样品,检得MTHFR C677T 3种基因型样品即CC、CT、TT的频率分别为0.59、 0.35、0.06;C和T等位基因频率分别为0.765和0.235,符合Hardy-Weinberg遗传平衡(χ2=0.0723,P=0.965>0.05)。结论该方法由于PCR产物中含有HinfI酶切内对照序列,能克服传统PCR-RFLP法酶切不完全可能导致基因型误判的缺点,简便、实用、准确,适合一般实验室应用及流行病学调查。

• 单位
  广东药科大学