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摘要
本研究旨在探讨安神定志方 (Anshen Dingzhi Prescription， ADP) 对小鼠阿尔茨海默病 (Alzheimer’s disease， AD) 样行为的改善作用及机制。采用超高效液相色谱-飞行时间质谱技术 (UPLC-Q-TOF-MS) 标定ADP的主要成分。以D-半乳糖 (D-galactose， D-gal) 协同Aβ1-42寡聚体 (Aβ oligomer， AβO) 诱导小鼠AD样行为， 运用多种行为学方法评估ADP对小鼠AD样行为的影响; Nissl染色与透射电镜观察海马组织的病理形态改变; ELISA检测氧化应激和炎症相关因子水平; Western blot检测Aβ、Tau和胶质纤维酸性蛋白 (glial fibrillary acidic protein， GFAP) 表达。根据TCMSP和HERB数据库筛选ADP的活性成分， 利用Swiss Target Prediction平台预测活性成分的作用靶点; 通过TTD、OMIM、GeneCards和DisGeNET数据库预测AD的疾病靶点; 运用Metascape数据库对共有靶点进行GO、KEGG富集分析。结合GO和KEGG分析结果进行体内实验验证， 从PI3K/Akt、钙信号通路以及突触功能角度探究ADP改善小鼠AD样行为的潜在机制。最后使用Autodock Vina对ADP的核心成分与已验证靶点进行分子对接。动物实验经安徽中医药大学动物伦理委员会批准 (批准号: AHUCM-mouse-2021080)。结果表明， ADP中含有ginsenoside Rg1、ginsenoside Rb1、tenuifolin、poricoic acid B、α-asarone等主要化学成分。ADP显著改善D-gal协同AβO诱导的AD小鼠焦虑样行为和记忆损伤， 保护海马神经元， 降低氧化应激和炎症水平， 抑制Aβ、磷酸化Tau表达。网络药理学结果提示PI3K/Akt、钙信号通路以及与突触后膜相关的细胞组分可能是ADP改善AD的关键因素。动物实验进一步确证ADP作用可以上调小鼠海马N-甲基-D-天氡氨酸离子型谷氨酸受体2A (N-methyl-D-aspartate receptor 2A， GluN2A)、突触后致密蛋白95 (postsynaptic density protein 95， PSD95)、钙蛋白酶1 (calpain-1)、磷酸化蛋白激酶B (phosphorylated protein kinase B， p-Akt)、磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白 (phosphorylated cAMP response element binding protein， p-CREB)、脑源性神经营养因子 (brain-derived neurotrophic factor， BDNF) 的表达， 抑制p-GluN2B和calpain-2表达。分子对接结果表明， ADP的核心成分panaxacol、dehydroeburicoic acid、deoxyharringtonine等与已验证靶点GRIN2A、GRIN2B、PSD95等均具有较强结合力。综上表明， ADP能够改善D-gal协同AβO诱导的小鼠AD样病理变化和行为改变， 其调控机制可能和NMDAR/calpain、Akt/CREB/BDNF通路有一定的关联性。
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