猪链球菌2型mrp基因ORF1序列的克隆及原核表达

作者：**隆; 柳纪省; 魏虎来; 李学瑞

来源：中国兽医科学, 2007, (08): 675-678.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2007.08.007

• 猪链球菌2型
• 溶菌酶释放蛋白
• 融合表达 Streptococcus suis type 2
• muramidase-released protein
• fusion expression

根据猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白基因(mrp)的序列,设计并合成了1对特异性引物,以青海株的基因组DNA为模板扩增了mrp基因ORF1序列。将PCR产物进行了T/A克隆,转化大肠杆菌,鉴定成功获得目的片段后,将其定向亚克隆到pET-28a(+)中,构建了原核表达质粒pET-28a-mrp,并将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,经1 mmol/L IPTG诱导和SDS-PAGE分析,出现了与预期目的蛋白一致的外源蛋白带(27.0 ku)。Western-blot分析表明,该融合蛋白具有MRP的抗原表位。研究结果为今后开展该病的免疫学研究奠定了一定基础。

• 单位
  农业部; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 兰州大学; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室