感染环形泰勒虫裂殖体的牛淋巴细胞酵母双杂交文库的构建

作者：岑双庆; 李有全; 刘志杰; 陈泽; 杨吉飞; 关贵全; 牛庆丽; 任巧云; 刘爱红; 罗建勋; 殷宏; 岳城

来源：中国兽医科学, 2014, 44(07): 667-671.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2014.07.014

• 环形泰勒虫
• 牛淋巴细胞
• 酵母双杂交
• cDNA文库

为研究环形泰勒虫裂殖体与牛淋巴细胞之间的相互作用,以感染了环形泰勒虫裂殖体的淋巴细胞系为材料,构建了感染环形泰勒虫裂殖体的牛淋巴细胞系的酵母双杂交cDNA文库。首先,提取纯化细胞系的mRNA,经反转录合成第一条链cDNA,通过LD-PCR合成双链cDNA。柱层析剔除250bp以下的小片段;将双链cDNA与经SmaⅠ处理过的文库质粒pGADT7-Rec一起转入到酵母Y187感受态细胞内,双链cDNA与文库质粒会发生同源重组,经过抗性筛选即可得到酵母双杂交cDNA文库。文库构建结果显示,该文库库容量达2.4×107 CFU,插入片段的平均长度在1 000bp左右,达到试剂盒建库要求。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 新疆农业大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所