构建携带人Sox2和EGFP基因慢病毒表达载体

作者：赵宗霞; 李芬霞; 王治荣; 常丽花; 陈庆

来源：中国优生与遗传杂志, 2016, 24(12): 27-2.

DOI：10.13404/j.cnki.cjbhh.2016.12.009

• SOX2
• EGFP
• 慢病毒载体

目的为了研究宫颈癌的发病机制,构建携带人Sox2基因和EGFP基因的慢病毒表达载体。方法使用限制性内切酶Sac II酶切p Lenti-EF1a-Sox2-IRES-EGFP质粒,回收线性片段并补平Sac II切口,然后Xba I酶切该线性片段,回收3.432kb目的片段便获连接用Sox2-IRES-EGFP片段;Eco RI线性化p FUGW,然后用BKL试剂盒将酶切产物补平,然后继续用Xba I酶切已线性化的p FUGW(Eco R I酶切位点已补平),获得9.122kb和819bp片段,回收9.122kb目的片段以获得连接用载体片段。最后使用DNA连接试剂盒(Ta Ka Ra)中的Solution I将连接用Sox2一IRES-EGFP(3.432kb)和连接用载体片段(9.122kb)连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,提取质粒行酶切鉴定。所构建新载体命名为p FUSGW。获p FUSGW载体后,按Invitrogen公司所推荐的标准程序进行慢病毒包装,然后确认慢病毒是否成功生产;使用携带Sox2和EGFP基因的慢病毒感染293FT细胞和宫颈癌细胞株CC-2、CC-3以建立相应的病毒感染体系。结果经酶切鉴定证实成功构建p FUSGW,按标准程序生产的携带Sox2和EGFP基因的慢病毒上清可高效率感染宫颈癌细胞株CC-2、CC-3。结论成功构建了携带人Sox2和EGFP基因的慢病毒表达载体p FUSGW,为宫颈癌发病机制的相关后续研究奠定良好的基础。

• 单位
  西安交通大学第二附属医院; 西北工业大学; 西安医学院第二附属医院